樹木褐根病之快速診斷試劑之研發及標準診斷作業流程(SOP)之建立發佈日期：2008/12/30
實施期間起迄
97年12月30日執行單位
吳孟玲、莊鈴木、王涼綢、蕭亞欣、陳菀菁執行成果
褐根病(brown root rot disease)是林木最嚴重的病害，由病原真菌Phellinus noxius所引起。樹木罹病初期不易以外部病徵來診斷，為掌握防治先機，針對病原菌應用聚合酶鏈鎖反應(PCR)進行分子檢測，有助於提高病害診斷效率。本研究以各林地採樣分離得到的褐根病菌為樣本，先以通用性引子對ITS1-F/ITS-4進行PCR增幅，產物經過定序與比對後重新設計出褐根病菌之專一性引子對G1F/G1R，引子對序列為G1F：5’- GCC CTT TCC TCC GCT TAT TG-3’； G1R：5’- CTT GAT GCT GGT GGG TCT CT -3’，可對褐根病菌增幅出653-bp的專一性片段。再利用改良後之快速程序抽取核酸，僅需菌絲洋菜塊0.16 cm2或0.15克感病根部樣本，抽取時程僅需2小時，即可進行聚合酵素連鎖反應。由檢測的結果發現改良後之核酸抽取方法能大幅縮短作業時程及成本，也證實G1F/G1R引子對樹木褐根病菌的專一性極佳，且可針對極少量之樣本進行檢測，其靈敏度可達10pg。本研究所研發的樹木褐根病快速且靈敏的PCR診斷技術，應能廣泛應用於林木褐根病診斷及疫情監控。【關鍵詞】褐根病、褐根病菌、聚合酵素連鎖反應
