體外成熟豬卵母細胞之人工激活發佈日期：2008/12/30
實施期間起迄
97年12月30日執行單位
林育安、陳銘正執行成果
本計畫為二年之研究計畫，第一年已先初步建立豬卵母細胞體外成熟、體外受精之系統。第二年已完成豬卵母細胞的激活試驗，共有 7 個小試驗，試驗一：探討酒精濃度對體外成熟豬卵母細胞激活率之影響。試驗結果指出，經培養於 M199 成熟培養液之豬卵母細胞，以 0、3、5、7 與 9% 酒精，激活 5 分鐘，總激活率分別為 8.6、25.4、29.2、40.8 與 25.3%，其中以 7% 處理組之激活率最高 (P<0.05)，3%、5% 與 9% 處理組間無顯著差異。具有一個原核與二個極體之卵母細胞 (1N2P)，也以 7% 處理組 (10.1%) 較高 (P<0.05)。試驗二：探討酒精激活時間對體外成熟豬卵母細胞激活率之影響。試驗結果指出，經培養於 M199 成熟培養液之豬卵母細胞，以 7% 酒精，激活 0、1、3、5 與 7 分鐘，總激活率分別為 3.8、16.0、24.8、33.0 與 29.3%，以激活 5 與 7 分鐘組之激活率最高 (P<0.05)。激活 3、5 與 7 分鐘組彼此間無顯著差異，但以 5 分鐘組之激活率稍佳。具有一個原核與二個極體之卵母細胞 (1N2P) 比率，3、5 與 7分鐘處理組彼此間亦無顯著差異，但以 5 分鐘處理組有較佳趨勢。試驗三：探討 Calcium ionophore (A23187) 濃度對體外成熟豬卵母細胞激活率之影響。試驗結果指出，經培養於 M199 成熟培養液之豬卵母細胞，以 0 (對照組)、100、200 與 300μM calcium ionophore (A23187)，激活 5 分鐘，總激活率分別為 7.7、56.2、53.7 與 32.6%。以 100 與 200 與 300 μM 組之激活率最高 (P<0.05)。三個處理組具有一個原核與二個極體之卵母細胞 (1N2P) 較對照組高 (P<0.05)。試驗四：探討 Ionomycin 濃度對體外成熟豬卵母細胞激活率之影響。試驗結果指出，經培養於 M199 成熟培養液之豬卵母細胞，以 0 (對照組)、5 與 10μM ionomycin，激活 5 分鐘，總激活率分別為 13.7、47.8 與 37.9%。以 5μM 組之激活率最高 (P<0.05)。具有一個原核與二個極體之卵母細胞 (1N2P)，以 5μM 與 10μM 組較對照組高 (P<0.05)。試驗五：探討 Ionomycin 與 DMAP 聯合作用對體外成熟豬卵母細胞激活率之影響。試驗結果指出，經培養於 M199 成熟培養液之豬卵母細胞，以 0 (對照組)、5μM ionomycin 5 min、5μM ionomycin 5 min + 1.9 mM DMAP 3hr 與 5μM ionomycin 5 min + NCSU23 胚培養液 3hr + 1.9 mM DMAP 3hr 等激活處理，總激活率分別為 10.7、38.4、49.8 與 56.3%。以 5μM 組之激活率最高 (P<0.05)。具有一個原核與二個極體之卵母細胞 (1N2P)，以 5μM ionomycin 5 min + NCSU23 胚培養液 3hr + 1.9 mM DMAP 3hr組之激活率最高，對照組最低 (P<0.05)，前者亦具有較高一個原核與二個極體 (1N2P) 之比率。試驗六：探討電激活強度對體外成熟豬卵母細胞激活率之影響。試驗結果指出，經培養於 M199 成熟培養液之豬卵母細胞，以 0、1.0、1.2 與 1.4 kv/cm 電激活，總激活率分別為 10.0、73.3、79.5 與 76.9%。電刺激顯著的影響卵母細胞之激活。具有一個原核與二個極體之卵母細胞 (1N2P) 比率，1.2 與 1.4 kv/cm 組較 1.0 kv/cm 組高(P<0.05)，1.2 與 1.4 kv/cm 組間無顯著差異，但以 1.2 kv/cm 組稍佳。試驗七：探討體外成熟豬卵母細胞激活後之發育。試驗結果指出，經培養於 M199 成熟培養液之豬卵母細胞，以 0 (對照組)、酒精 (7%, 5 min)、A23187 (100μM,5min)、ionomycin (5μM,5min)、ionomycin (5μM,5min) + NCSU23 (胚培養液，3hr) +DMAP (1.9Mm, 3hr) 與電激活 (1.2kv/cm) 處理，卵裂率為2.8、14.0、36.9、37.4、39.8 與 50.0%。發育到 8 細胞期以 ionomycin + NCSU23 +DMAP 組 (7.4%) 與電激活組 (11.5%) 最高 (P<0.05)。
