體外成熟豬卵母細胞應用於核移置 (複製動物) 之評估發佈日期：2009/12/30
實施期間起迄
98年12月30日執行單位
林育安執行成果
本計畫為二年之研究計畫，今年已先初步建立幾項技術：第一為供核細胞---豬卵丘細胞與豬耳朵細胞之培養、繼代培養、冷凍與解凍技術。第二為建立進行核移置時固定針、去核針與注核針之技術。試驗方面：共有三個小試驗，試驗一：探討成熟培養液 (M199 與 NCSU23) 對豬卵母細胞體外成熟、體外受精與後續胚發育之影響。試驗結果指出，M199 組與 NCSU23 組之成熟率、受精率與雄原核形成率，彼此間無顯著差異，但 NCSU23 組胚發育之比率高於 M199 組 (P<0.05)。試驗二：培養於 M199 與 NCSU23 成熟培養液之體外成熟豬卵母細胞以新鮮卵丘細胞進行核移置可行性之探討。結果顯示，M199 組與 NCSU23 組核移置重組卵之激活率分別為 36.3% 與 47.6% (P<0.05)，其中一個 (原) 核 (1N) 之形成率以 NCSU23 組較 M199 組高 (36.9% 與 26.2%，P<0.05)。M199 組與 NCSU23 組之核移置重組胚發育率分別為34.4% 與 45.6% (P<0.05)，但發育到 2 細胞、4 細胞、8 細胞與桑椹胚期之比率，彼此間無顯著差異。從試驗一與二之結果得知，NCSU23 成熟培養液較M199成熟培養液有利於後續胚之發育。試驗三：探討繼代培養之卵丘細胞為供核體細胞對體外成熟豬卵母細胞之核移置重組卵激活暨隨後胚發育之影響。試驗結果顯示，豬卵丘細胞經繼養 2 ~ 4 代，進行核移置，核移置重組卵之激活率顯著高於對照組 (新鮮卵丘細胞：F0)、F6 與 F8 組；且重組胚之發育率也顯著高於對照組 (新鮮卵丘細胞：F0)、F6 與 F8 組。以繼養 2 ~ 4 代之豬卵丘細胞作為供核細胞，可能因其細胞週期與受核細胞 (卵母細胞) 之細胞週期較同期化所故，因而較其他各組有較高之激活率與胚發育率。
