紅豆分子農場在蛋白質或工業酵素產製的應用發佈日期：2007/01/01
實施期間起迄
96年01月01日執行單位
程台生、連大進、陳麗珠、彭國証執行成果
本實驗的目的，是從生物防治真菌Trichoderma harzianum中，純化出「木聚醣_」 (xylanase)，經由定序分析，找出該酵素之胺基酸序列。未來可以運用PCR選殖木聚醣_基因，用於植物基因轉殖研究。首先，利用木聚醣(Xylan)當作T. harzianum的碳源進行液態培養，而xylanase會在培養基中大量產生。將培養液經過濾與離心，去除T. harizanum菌絲與孢子；接著使用 ultrafiltration濾除大於30kDa的蛋白質，然後將過濾完的濾液利用硫酸胺鹽使其總蛋白質沉澱。之後，將沉澱物經由水及檸檬酸鹽溶液透析，去除沉澱物中的硫酸胺鹽以及其他溶質，並且經冷凍乾燥濃縮，將定量蛋白質樣品以gel filtration進行蛋白質分離後，再將分管收集之蛋白質，進行蛋白質電泳、酵素活性與蛋白質總量之分析，找到較純之xylanase的樣品。最後，經由透析和冷凍乾燥，得到濃度與純度都較高的 xylanase，並利用2D電泳分析後，進行胺基酸定序。本研究的下一階段工作，是將xylanase胺基酸序列以BLAST比對後，找到最相似的 xylanase gene序列，利用PCR從T. harzianum cDNA library中，選殖出xylanase gene，一方面可利用該基因進行轉殖和表現；另外，可以再進一步進行生產與功能性之分析。最佳，葉底紅勻，發酵速率較快。但經攪拌處理後，若茶菁萎凋率太低(含水量高)，攪拌後會有「積水」現象，茶湯表現會較苦澀。要製造高級紅茶，茶菁採摘應控制適度嫩採，若過於粗老，製成紅茶條索粗鬆，黃片多，且滋味淡薄。